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      非編碼RNA:microRNA和lncRNA檢測(cè)
      來(lái)源:Genenode|君諾德公司     發(fā)布時(shí)間:2019-04-19     Hits:6367

      非編碼RNA是指不編碼蛋白質(zhì)的RNA,因其異常表達(dá)而與許多疾病發(fā)生密切相關(guān),在細(xì)菌、真菌、哺乳動(dòng)物等許多生物體的生命活動(dòng)中發(fā)揮著極廣泛的調(diào)控作用, 因此受到研究者的重視并成為熱點(diǎn)研究領(lǐng)域。 


      非編碼RNA目前主要研究包括長(zhǎng)鏈非編碼RNA和微小RNA,長(zhǎng)鏈非編碼RNA(Long non-coding RNA, lncRNA)通過(guò)多種機(jī)制發(fā)揮其生物學(xué)功能, 這些機(jī)制包括基因印記、染色質(zhì)重塑、細(xì)胞周期調(diào)控、剪接調(diào)控、mRNA 降解和翻譯調(diào)控等。lncRNA 通過(guò)這些作用機(jī)制在不同水平進(jìn)行基因表達(dá)調(diào)控;而微小RNA(microRNA,miRNA)是一種長(zhǎng)度約21-23nt的非編碼RNA,成熟的miRNA主要作用是對(duì)基因轉(zhuǎn)錄后水平進(jìn)行負(fù)向調(diào)節(jié),通過(guò)引起其靶mRNA的降解或翻譯過(guò)程的中斷而參與細(xì)胞增殖、凋亡、免疫、神經(jīng)內(nèi)分泌以及干細(xì)胞分化等眾多生命過(guò)程??傊?,它們不再被認(rèn)為是不能編碼蛋白質(zhì)的垃圾RNA,而研究非編碼RNA對(duì)了解基因調(diào)控、基因敲除、人類疾病防治及生物進(jìn)化探索等都具有重要意義。 


      目前用于非編碼RNA研究的主要方法有轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、Northern 印跡、實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)、熒光原位雜交、RNA 干擾和 RNA 結(jié)合蛋白免疫沉淀等,而熒光定量PCR方法作為檢測(cè)非編碼RNA表達(dá)的金標(biāo)準(zhǔn),其應(yīng)用更是廣泛。


      關(guān)于microRNA
      1.microRNA發(fā)現(xiàn)
         1993年Lee等在秀麗新小桿線蟲內(nèi)首次發(fā)現(xiàn)非編碼蛋白質(zhì)但能時(shí)序調(diào)控其胚胎后期發(fā)育基因表達(dá)的小分子RNA:lin-4。2000年Reinhart等在對(duì)線蟲的發(fā)育調(diào)控研究中發(fā)現(xiàn)第二種miRNA:Let-7,接著人們相繼在細(xì)菌、果蠅、線蟲、斑馬魚、動(dòng)植物與人體內(nèi)發(fā)現(xiàn)大量的miRNA編碼基因,進(jìn)一步研究證實(shí)MicroRNA主要通過(guò)調(diào)控其靶基因mRNA在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控蛋白表達(dá),最新有報(bào)道m(xù)icroRNA也能在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控基因表達(dá)。 


      2.microRNA作用機(jī)制
         在細(xì)胞核內(nèi),由DNA轉(zhuǎn)錄生成pri-pre-microRNA被Drosha酶切割pri-pre-miRNA成形成長(zhǎng)度大約70-100堿基的、具發(fā)夾結(jié)構(gòu)的pre-microRNA。該前體RNA經(jīng)核輸出蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞質(zhì),經(jīng)Dicer酶切割形成成熟的miRNAs。成熟miRNA主要是以RISC(RNA-induced silencing complex)復(fù)合體形式結(jié)合于靶mRNA而發(fā)揮基因表達(dá)調(diào)控作用。 


      3.microRNA應(yīng)用與檢測(cè)
          由于microRNA在眾多程序的調(diào)控,諸如生物發(fā)育、細(xì)胞增殖和凋亡以及近來(lái)被證明與腫瘤發(fā)生相關(guān)等領(lǐng)域發(fā)揮作用,因此其鑒定和定性研究成為迅速發(fā)展的一大研究領(lǐng)域;   

      microRNA應(yīng)用與檢測(cè)
      4. microRNA檢測(cè)流程--高通量熒光定量PCR法

      microRNA檢測(cè)流程

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