產(chǎn)品中心

新型植物基因組DNA提取試劑盒(離心柱型)

Novel Plant DNA Extraction Kit(Column)

包裝規(guī)格：

一.產(chǎn)品介紹：
    該試劑盒采用DNA吸附柱和新型獨特的溶液系統(tǒng)，適合于從含酚類、多糖類和酶抑制物的植物樣品中快速簡單地提取基因組DNA?？稍?0分鐘內(nèi)完成一個或多個100mg新鮮或20mg干燥的植物樣品DNA的純化工作。提取過程不需要用到有毒的酚氯仿等有機物抽提，也不需要用到耗時的異丙醇或乙醇沉淀，并能快速高效地去除多糖類、酚類和酶抑制物等雜質(zhì)，純化的DNA可直接用于PCR、酶切和雜交等實驗。

    新鮮或干燥的植物組織（細胞）磨碎后經(jīng)裂解液裂解；蛋白質(zhì)、多糖、細胞殘片被沉淀去除；然后基因組DNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜， 再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟, 進一步將多糖，多酚和細胞代謝物，蛋白等雜質(zhì)去除， 最后低鹽的洗脫緩沖液將純凈基因組DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。

二.產(chǎn)品特點：
1.離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜采用進口特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復性好?？朔藝a(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。
2.不需要使用有毒的苯酚*仿等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟。
3.快速，簡捷，單個樣品操作一般可在1小時內(nèi)完成。
4.數(shù)種去多糖、多酚成份和多次柱漂洗確保高純度，OD260/OD280典型的比值達1.7～1.9，可直接用于PCR，Southern-blot和各種酶切反應。

三.適用范圍：
    適用于快速提取植物組織、細胞、真菌基因組DNA。

四.儲存條件：
1.裂解液AP1、AP3/E低溫時可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以在65℃水浴幾分鐘幫助重新溶解（AP3加入乙醇前可加熱，加入乙醇后不可加熱），恢復澄清透明后冷卻到室溫即可使用。
2.避免試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH值變化，各溶液使用后應及時蓋緊蓋子。

五.注意事項：
1.所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉(zhuǎn)速可以達到13，000 rpm的傳統(tǒng)臺式離心機，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機。
2.開始實驗前將需要的水浴先預熱到65℃?zhèn)溆谩?br /> 3.緩沖液AP3/E中含有刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。
4.不同來源的植物組織材料中提取DNA 的量會有差異，一般100mg新鮮組織典型產(chǎn)量可達3-25μg。
5.洗脫液EB不含有螯合劑EDTA， 不影響下游酶切、連接等反應。也可以使用水洗脫， 但應該確保pH大于7.5， pH過低影響洗脫效率。用水洗脫DNA應該保存在－20℃。DNA如果需要長期保存，可以用TE緩沖液洗脫 （10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影響下游酶切反應，使用時可以適當稀釋。

七.操作步驟：（實驗前請先閱讀注意事項）
    提示：
    第一次使用前請先在漂洗液WB中加入指定量無水乙醇，充分混勻，加入后請及時在方框打鉤標記已加入乙醇，以免多次加入!
    第一次使用前請先在緩沖液AP3/E中加入指定量無水乙醇!
1.取適量植物組織（新鮮組織100 mg 或干重組織20 mg，可適當多取一些樣品彌補粘在研缽上的損失）在研缽中加入液氮充分碾磨成細粉。
研磨前，可準備一個1.5ml 離心管，加入400μl緩沖液AP1 和4μl RNase A(10 mg/ml)室溫備用。 

2.轉(zhuǎn)移細粉（新鮮組織100 mg 或干重組織20 mg）到前面準備的1.5ml離心管（已加入400μl緩沖液AP1 和4μl RNase A(10 mg/ml)旋渦振蕩，充分混勻幫助裂解。
如果組織裂解困難，可根據(jù)需要加一個輕柔勻漿10秒的步驟幫助裂解。大多數(shù)情況下不需要離心去除未完全裂解的組織，因為后面有一個離心去除的步驟。

3.65℃水浴10分鐘，在水浴過程中顛倒離心管2-3次，混合樣品。

4.加入130 μl 緩沖液AP2，充分混勻，冰上放置5分鐘， 14,000 rpm 離心5-10 分鐘，小心吸取上清到一個新的1.5ml離心管，注意不要吸到界面物質(zhì)。

5.計算上清量，加入1.5倍體積的AP3/E（請先檢查是否已加入無水乙醇!），立即吹打混勻。
加入AP3/E可能會出現(xiàn)絮狀沉淀，但不影響DNA提取。注意將AP3/E直接加入到上清并立即吹打混勻。

6.將上一步所得混合物（包括可能出現(xiàn)的沉淀）加入一個吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13,000 rpm離心30-60秒，倒掉收集管中的廢液（先加650μl離心，棄廢液，再加入剩余的溶液，再次離心）。

7.加入600μl漂洗液WB（請先檢查是否已加入無水乙醇!），12,000 rpm 離心30秒，棄掉廢液。

8.加入600μl漂洗液WB，12,000 rpm 離心30秒，棄掉廢液。

9.將吸附柱AC放回空收集管中，13,000 rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液， 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應。

10.取出吸附柱AC，放入一個干凈的離心管中，在吸附膜的中間部位加100μl洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液可事先在 65-70℃水浴中預熱）， 室溫放置3-5分鐘，12,000 rpm 離心1分鐘。將得到的溶液重新加入吸附柱中，室溫放置2分鐘，12,000 rpm離心1分鐘。
洗脫體積越大，洗脫效率越高，如果預計和需要產(chǎn)量高，可增大洗脫體積，如果需要DNA濃度較高，可以適當減少洗脫體積， 但是最小體積不應少于50μl，體積過小降低DNA洗脫效率，減少DNA產(chǎn)量。

11.DNA可以存放在2-8℃,如果要長時間存放，可以放置在－20℃。