技術服務

Luciferase報告基因檢測服務，采用熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)，以熒光素(luciferin)為底物來檢測螢火蟲熒光素酶(firefly luciferase)活性。該系統(tǒng)的檢測原理是，熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在熒光素氧化的過程中，會發(fā)出生物熒光，然后可以通過熒光測定儀也稱化學發(fā)光儀或液閃測定儀測定熒光素氧化過程中釋放的生物熒光，熒光閃爍總數(shù)與樣品中存在熒光素酶的活性成正比。

實驗流程：
1.構建一個將靶啟動子的特定片段插入到熒光素酶表達序列前方的報告基因質粒，如psiCHECK等。 
2.將要檢測的轉錄因子表達質粒與報告基因質粒共轉染293細胞或其它相關的細胞系。如果此轉錄因子能夠激活靶啟動子，則熒光素酶基因就會表達，熒光素酶的表達量與轉錄因子的作用強度成正比。 
3.加入特定的熒光素酶底物，熒光素酶與底物反應，產(chǎn)生熒光，通過檢測熒光的強度可以測定熒光素酶的活性，從而判斷轉錄因子是否能與此靶啟動子片段有作用。 

應用范圍：檢測轉錄因子與目的基因啟動子區(qū)DNA的相互作用

應用領域
1.熒光素酶基因標記基因
2.熒光素酶基因標記細胞
3.熒光素酶基因標記微生物
4.活體生物體內(nèi)成像
5.藥物篩選
6.雙報告基因系統(tǒng)

技術特點：
1.采用Promega公司特有psiCHECK質粒；
2.所采用的Luciferase雙熒光報告系統(tǒng)，可以獲得寬泛的線性定量范圍與極高的靈敏度；
3.采用瞬時轉染技術，操作簡便、快速，周期短，適用于絕大多數(shù)細胞類型。

服務流程：
1.PCR擴增靶基因的Promoter，或直接合成結合位點序列； 
2.片段裁切或點突變設計靶基因的Promoter并以PCR擴增，或直接合成序列； 
3.將上述不同DNA片段分別克隆至報告載體pGL4質粒； 
4.將報告載體轉染待檢細胞； 
5.多功能酶標儀檢測報告基因的表達水平。

客戶提供：
1.miRNA與靶基因的信息；
2.相應檢測細胞株。

最終提交結果：
1.克隆含有靶基因3’UTR或結合位點序列的報告質粒； 
2.檢測結果與完整的實驗報告。