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All-in-One First Strand cDNA Synthesis Kit(一管式第一鏈反轉(zhuǎn)錄試劑盒)

產(chǎn)品規(guī)格：

貨號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格	目錄價
P4204-50	All-in-One First Strand cDNA Synthesis Kit(一管式第一鏈反轉(zhuǎn)錄試劑盒)	50T	500
P4204-100	All-in-One First Strand cDNA Synthesis Kit(一管式第一鏈反轉(zhuǎn)錄試劑盒)	100T	900
P4204-1K	All-in-One First Strand cDNA Synthesis Kit(一管式第一鏈反轉(zhuǎn)錄試劑盒)	10*100T	8560

產(chǎn)品介紹：
      本試劑盒是專為一步法RT-PCR實驗配制的，使用該試劑盒能夠方便快捷的在同一個反應(yīng)管內(nèi)完成逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)和PCR擴增反應(yīng)。反應(yīng)過程中無需打開管蓋添加試劑，避免了污染的同時提高了檢測靈敏度和實驗效率。本試劑盒包括最佳配比優(yōu)化的OneStep Enzyme Mix（包含突變改造TRUEscript M-MuLV H Minus逆轉(zhuǎn)錄酶、熱啟動HotMaster Taq DNA聚合酶和RNasin抑制劑mix），同時包含適用于逆轉(zhuǎn)錄和PCR擴增的獨特2 XRT-PCR Mix反應(yīng)體系。本酶M-MuLV(RNase Hˉ)的RNase H活性缺失，與M-MuLV 相比，具有更強的延伸能力和穩(wěn)定性，可用于較長的cDNA合成以及高比例的全長cDNA文庫的構(gòu)建等。同時該酶提高了耐熱性，可以在42-50?C反轉(zhuǎn)錄，提高了復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)，GC含量豐富模板反轉(zhuǎn)錄效率。

產(chǎn)品存儲：－20?C 保存，有效期6個月。

適用范圍：適用于高拷貝、低拷貝基因檢測；部分高GC含量或具有復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)的RNA模板。

建議反應(yīng)體系（20 μl-50μl）：
注意：2 XRT-PCR Mix使用前充分融解顛倒混勻（避免劇烈渦旋產(chǎn)生大量氣泡）。短期頻繁使用可放4?C冰箱。
根據(jù)下表冰上配制反應(yīng)液：

Components	Volume	Final Concentration
2×RT-PCR Mix	10 μl	1 X
Forward Primer（10μm）	0.4 μl	0.2 μM
Reverse Primer（10μm）	0.4 μl	0.2 μM
TRUEscript Enzyme Mix	0.8 μl	-
RNA template	X μl	1 pg-1μg
RNase free H2O to final volume	20 μl	Not applicable

注意：引物濃度請以終濃度0.2-0.6μM作為設(shè)定范圍的參考。擴增效率不高的情況下，可提高引物的濃度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時，可降低引物濃度，由此優(yōu)化反應(yīng)體系。如果同進行多個反應(yīng)，先按比例配成混合液，振蕩混勻后，按每管 20-Xμl (X為模板量)分裝。

PCR擴增：
1. 將配制好的反應(yīng)體系混勻、離心后。
2. 將熱循環(huán)儀預(yù)熱到42?C，將PCR管置于熱循環(huán)儀中，按以下反應(yīng)條件進行反應(yīng)。
擴增程序：

	溫度	時間	循環(huán)數(shù)
1	42°C	30分鐘	1
2	94°C	2-3分鐘	1
3	94°C	30 秒	30-40
	50-60°C	30 秒
	72°C	1-2kb/分鐘
4	72°C	5-10分鐘	1
5	4°C	保溫

注意：可根據(jù)擴增產(chǎn)物的下游應(yīng)用設(shè)定循環(huán)數(shù)。循環(huán)次數(shù)太少，擴增量不足；循環(huán)次數(shù)多，錯配機率會增加，非特異性背景嚴重。所以，在保證產(chǎn)物得率的前提下，應(yīng)盡量減少循環(huán)次數(shù)。

注意事項：
●避免RNase污染。
●為保證反應(yīng)成功建議使用高質(zhì)量的RNA模板
●不同的片段，所需最佳RNA模板用量不同，過多的RNA會抑制反應(yīng)，建議根據(jù)反應(yīng)調(diào)整模板用量。
●不能使用Oligo(dT) 和Random Primer 合成cDNA。