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One Step RT-qPCR Probe Kit(一步法熒光定量反轉(zhuǎn)錄RT-qPCR Kit)

產(chǎn)品名稱：

貨號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格	目錄價
P4305-125	One Step RT-qPCR Probe Kit(一步法熒光定量反轉(zhuǎn)錄RT-qPCR Kit)	125T	950
P4305-250	One Step RT-qPCR Probe Kit(一步法熒光定量反轉(zhuǎn)錄RT-qPCR Kit)	250T	1800

產(chǎn)品介紹：
      本試劑本制品是采用SYBR Green I 嵌合熒光法進行Real Time PCR 的專用試劑，用本制品進行Real Time qRT-PCR 可在同一反應(yīng)管內(nèi)連續(xù)進行。反應(yīng)過程中無需打開管蓋添加試劑并可對擴增產(chǎn)物進行實時檢測，避免了污染的同時提高了檢測靈敏度和實驗效率。非常適合于微量RNA 尤其是微量RNA病毒的檢測。本試劑盒包括最佳配比優(yōu)化的OneStep Enzyme Mix（包含突變改造TRUEscript M-MuLV H Minus逆轉(zhuǎn)錄酶、熱啟動HotMaster Taq DNA聚合酶和RNasin抑制劑mix），同時包含適用于逆轉(zhuǎn)錄和熒光PCR擴增的獨特2 XqRT-PCR Mix反應(yīng)體系。本酶M-MuLV(RNase Hˉ)的RNase H活性缺失，與M-MuLV 相比，具有更強的延伸能力和穩(wěn)定性。同時該酶提高了耐熱性，可以在42-50?C反轉(zhuǎn)錄，提高了復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)，GC含量豐富模板反轉(zhuǎn)錄效率。而采用優(yōu)質(zhì)熱啟動酶HotMaster Taq DNA Polymerase可以最大限度的減少PCR擴增全程中的非特異性擴增產(chǎn)物產(chǎn)生，大大提高了熒光定量PCR反應(yīng)的精確性。本制品可以在寬廣的定量區(qū)域內(nèi)得到良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線，對靶基因進行準(zhǔn)確定量檢測，重復(fù)性好，可信度高。

產(chǎn)品存儲：－20℃ 保存，有效期6個月。

適用范圍：
適用于高拷貝、低拷貝基因檢測；部分高GC含量或具有復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)的RNA模板。

注意事項：
● 當(dāng)同時需要進行數(shù)次Real Time One Step qRT-PCR反應(yīng)時，應(yīng)先配制各種試劑的混合液（Master Mix，其中包括RNase-free ddH2O、Buffer、各種酶等），然后再分裝到每個反應(yīng)管中。這樣可使所取的試劑體積更準(zhǔn)確，減少試劑損失，避免重復(fù)分取同一試劑。同時也可以減少實驗操作或?qū)嶒灅悠分g產(chǎn)生的誤差。
● 使用TRUEscript Enzyme Mix時，分取之前要小心地瞬間離心收集到反應(yīng)管底部；由于酶保存液中含有高濃度的甘油，粘度高，分取時應(yīng)慢慢吸取。
● 2 XqRT-PCR Mix內(nèi)含Sybr Green I，保存或配制One Step qRT-PCR反應(yīng)液時應(yīng)避免強光照射。
● 為保證反應(yīng)成功建議使用高質(zhì)量的RNA模板。
● 不同的片段，所需最佳RNA模板用量不同，過多的RNA會抑制反應(yīng)，建議根據(jù)反應(yīng)調(diào)整模板用量。
● 只能使用特異性引物，不能使用Oligo(dT) 和Random Primer 進行反應(yīng)。

建議反應(yīng)體系（20 μl）：
注意：2 XqRT-PCR Mix使用前充分融解顛倒混勻（避免劇烈渦旋產(chǎn)生大量氣泡）。短期頻繁使用可放4?C冰箱。
 根據(jù)下表冰上配制反應(yīng)液：

Components	Volume	Final Concentration
2×qRT-PCR Mix	10 μl	1 X
Forward Primer（10μm）	0.4 μl	0.2 μM
Reverse Primer（10μm）	0.4 μl	0.2 μM
TRUEscript Enzyme Mix	0.8 μl	-
RNA template	X μl	1 pg-1μg
RNase free H2O to final volume	20 μl	Not applicable

注意：引物濃度請以終濃度0.2-0.6μM作為設(shè)定范圍的參考。擴增效率不高的情況下，可提高引物的濃度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時，可降低引物濃度，由此優(yōu)化反應(yīng)體系。如果同進行多個反應(yīng)，先按比例配成混合液，振蕩混勻后，按每管 20-Xμl (X為模板量)分裝。